Κιτ PCR σε πραγματικό χρόνο Virus Monkeypox

1. ΔείγμαΣυλλογή:Το δείγμα πρέπει να συλλέγεται σε αποστειρωμένους σωλήνες σύμφωνα με

με τυπικές τεχνικές προδιαγραφές.

2. Προετοιμασία αντιδραστηρίου (Περιοχή προετοιμασίας αντιδραστηρίου)

Βγάλτε τα εξαρτήματα του κιτ, ισορροπήστε τα σε θερμοκρασία δωματίου για χρήση σε κατάσταση αναμονής.

3. Επεξεργασία δείγματος (Περιοχή επεξεργασίας δείγματος)

3.1 Εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος

Συνιστάται η λήψη υγρών δειγμάτων 200μL, θετικού μάρτυρα και αρνητικού μάρτυρα για εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος, σύμφωνα με τις αντίστοιχες απαιτήσεις και διαδικασίες των κιτ εξαγωγής DNA ιού.

3.2 Διάλυση λυοφιλοποιημένης σκόνης και προσθήκη προτύπου

Προετοιμάστε το λυοφιλοποιημένο προμίγμα του ιού της ευλογιάς των πιθήκων σύμφωνα με τον αριθμό των δειγμάτων.Ένα δείγμα χρειάζεται ένα σωληνάριο PCR που περιέχει λυοφιλοποιημένη σκόνη προμίγματος.Ο αρνητικός μάρτυρας και ο θετικός μάρτυρας θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δύο δείγματα.

(1) Προσθέστε 15 μL Διαλυτικού Διαλύματος σε κάθε σωληνάριο PCR που περιέχει Λυοφιλοποιημένο προμίγμα και, στη συνέχεια, προσθέστε 5 μL εκχυλισμένων δειγμάτων/ Αρνητικό μάρτυρα/Θετικό μάρτυρα σε κάθε σωληνάριο PCR αντίστοιχα.

(2) Καλύψτε σφιχτά τα σωληνάρια PCR, κτυπήστε τα σωληνάρια PCR με το χέρι μέχρι να διαλυθεί πλήρως η λυοφιλοποιημένη σκόνη και να αναμειχθεί, συλλέξτε το υγρό στον πυθμένα των σωληναρίων PCR με στιγμιαία φυγοκέντρηση χαμηλής ταχύτητας.

(3) Εάν χρησιμοποιείτε κοινό όργανο PCR πραγματικού χρόνου για ανίχνευση, τότε μεταφέρετε απευθείας σωλήνες PCR στην περιοχή ενίσχυσης.εάν χρησιμοποιείτε το BTK-8 για ανίχνευση, τότε πρέπει να εκτελέσετε τις ακόλουθες λειτουργίες: μεταφέρετε 10 μL υγρού από το σωλήνα PCR στο φρεάτιο του τσιπ αντίδρασης του BTK-8.Ένας σωλήνας PCR αντιστοιχεί σε ένα φρεάτιο στο τσιπ.Κατά τη λειτουργία της πιπέτας, βεβαιωθείτε ότι η πιπέτα είναι κατακόρυφα 90 μοίρες.Οι μύτες της πιπέτας φραγμού αερολύματος πρέπει να τοποθετούνται στο κέντρο του φρεατίου με μέτρια δύναμη και να σταματήσουν να πιέζουν την πιπέτα όταν φτάσει στην πρώτη ταχύτητα (για να αποφύγετε φυσαλίδες).Αφού γεμίσουν τα φρεάτια, αφαιρέστε μια μεμβράνη τσιπ αντίδρασης για να καλύψει όλα τα φρεάτια και το τσιπ μεταφέρεται στη συνέχεια στην περιοχή ανίχνευσης ενίσχυσης.

4. Ενίσχυση PCR (περιοχή ανίχνευσης)

4.1 Τοποθετήστε τους σωλήνες PCR/τσιπ αντίδρασης στη δεξαμενή αντίδρασης και ρυθμίστε τα ονόματα κάθε φρεατίου αντίδρασης με την αντίστοιχη σειρά.

4.2 Ρυθμίσεις ανίχνευσης φθορισμού: (1) Ιός της ευλογιάς των πιθήκων (FAM).(2) Εσωτερικός Έλεγχος (CY5).

4.3 Εκτελέστε το ακόλουθο πρωτόκολλο ποδηλασίας

Πρωτόκολλο ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Πρωτόκολλο BTK-8:

5. Ανάλυση αποτελεσμάτων (ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο χρήστη του οργάνου)

Μετά την αντίδραση, τα αποτελέσματα θα αποθηκευτούν αυτόματα.Κάντε κλικ στο "Analyze" για ανάλυση και το όργανο θα ερμηνεύσει αυτόματα τις τιμές Ct κάθε δείγματος στη στήλη αποτελεσμάτων.Τα αρνητικά και θετικά αποτελέσματα του ελέγχου πρέπει να συμμορφώνονται με τα ακόλουθα "6. Ποιοτικός Έλεγχος".

6. Ελεγχος ποιότητας

6.1 Αρνητικός έλεγχος: Χωρίς Ct ή Ct>40 στο κανάλι FAM, Ct≤40 στο κανάλι CY5 με κανονική καμπύλη ενίσχυσης.

6.2 Θετικός μάρτυρας: Ct≤35 σε κανάλι FAM με κανονική καμπύλη ενίσχυσης, Ct≤40 σε κανάλι CY5 με κανονική καμπύλη ενίσχυσης.

6.3 Το αποτέλεσμα είναι έγκυρο εάν πληρούνται όλα τα παραπάνω κριτήρια.Διαφορετικά, το αποτέλεσμα είναι άκυρο.

Ερμηνεία Αποτελεσμάτων

Τα ακόλουθα αποτελέσματα είναι πιθανά:

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Εάν προκύψει μη έγκυρο αποτέλεσμα, το δείγμα πρέπει να συλλεχθεί και να ελεγχθεί ξανά.